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大鼠纹状体内生长抑素阳性神经元的分布特征

周老师2025-09-01人体生理学论文3800

基底核在调节机体运动和认知功能方面具有极其重要的作用[1].纹状体是基底核的主要核团，参与许多学习记忆相关的认知功能[2],其广泛接受大脑皮质、丘脑和中脑的兴奋性传入[3].纹状体各区接受不同的信息，意味着各区有不同的生理功能[4].纹状体中有许多神经肽...

　　基底核在调节机体运动和认知功能方面具有极其重要的作用[1].纹状体是基底核的主要核团，参与许多学习记忆相关的认知功能[2],其广泛接受大脑皮质、丘脑和中脑的兴奋性传入[3].纹状体各区接受不同的信息，意味着各区有不同的生理功能[4].纹状体中有许多神经肽物质存在，如生长抑素（ somatostatin,SOM） .SOM 作为神经递质或调质在中枢神经系统中参与了多种生理机能的活动和调节[5,会引起机体各种行为和生理学变化，改变睡眠模式、食物消耗、运动机能、记忆等过程[6],且脑内的 SOM 还与认知障碍有关[7].而 SOM 阳性神经元在纹状体各区具体的分布鲜见报道，本实验采用免疫组织化学法对大鼠纹状体内 SOM 阳性神经元的分布及其形态特征进行观察，不仅为大鼠脑的比较解剖学积累相关资料，也为进一步研究大鼠纹状体不同区域的功能提供形态学资料。

　　材料和方法

　　1. 取材与切片制备

　　健康 SD 雄性大鼠 6 只，购自北京大学实验动物中心[实验动物合格证号： SCXK （京） 2012-0001],体重 180 ~ 200g,购入后置于安静、室温 25℃左右、避强光和自由摄食的环境中饲养 3d 以适应环境。7%水合氯醛（ 4ml/kg）腹腔注射麻醉后，大鼠灌流固定取脑，经 4% 多聚甲醛溶液后固定 24h,置于 30%蔗糖溶液中过夜至脑块沉底，制作 30μm 厚的冷冻冠状连续切片，切片每隔 6 张取 1 张。切片制备 2 套，1 套用于免疫组织化学染色，另 1 套作阴性对照。

　　2. 免疫组织化学标记

　　免疫组织化学 ABC 法染色主要步骤：先用 2%H2O2室温孵育切片 15 min,以消除内源性过氧化物酶的活性；滴加 1∶ 2000 兔抗 SOM 多克隆抗体（ T-4103; Peninsula Laboratories 股份有限公司） ,4℃ 孵育过夜；滴加 1∶ 100 生物素化的驴抗兔 IgG（ 711-067-003; Jackson 公司） ,室温孵育 2h; 依据说明书滴加1∶ 100 ABC 复合物试剂盒（ Vector 公司）中的试剂，室温孵育 30 min; DAB（ Sigma 公司）显色。以上各步骤之间均用含 0. 3% TritonX-100 的 5 mmol/LPBS（ pH7. 4）冲洗 3 次，每次 10 min.切片常规脱水、透明、中性树胶封片。光学显微镜下观察可见免疫反应阳性产物呈棕黄色。阴性对照除用 PBS 代替一抗，其余步骤同上。

　　3. 显微镜观察、统计学和数据处理

　　在光学显微镜下观察免疫组织化学切片，每只动物随机取 5 张共 30 张含有纹状体的切片。免疫组织化学阳性区域用数码显微镜（ Ni-U; Nikon 公司）摄片。用 Canvas X 软件将照片拼成完整的纹状体并以十字线将其分为背外侧区（ dorsal lateral,DL）、腹外侧区（ ventral lateral,VL ）、背内侧区（ dorsal medial,DM）、腹内侧区（ ventral medial,VM） 4 个区域（图 1A） ; 用 Image-Pro Plus 6. 0 软件分析测量纹状体内不同区域 SOM 阳性神经元的数量和胞体面积，测量阳性表达区域的平均吸光度（ absorbance,A）值（吸光度值/检测区域面积） .实验所得数据均采用 SPSS17. 0 软件进行 One-wayANOVA 单因素方差分析，结果用均值 ± 标准差（ x ±s）表示，P < 0. 05 为差异有显着性。

　　结果

　　1. 大鼠纹状体 SOM 阳性神经元的分布

　　DAB 显色后光学显微镜观察可见，SOM 免疫反应阳性细胞呈现散在深浅不均的棕黄色（图 1B） ,SOM 阳性神经元在纹状体不同区域细胞数量百分比（表 1）为 VM 区最多（ 28. 34 ± 3. 20） %,其次是DM 区（ 27. 64 ± 3. 52 ） % 和 VL 区（ 24. 98 ±3. 17） % ,DL 区最少（ 19. 04 ± 3. 12） % ,其中两个外侧区（ DL 与 VL）、两个背侧区（ DL 与 DM）差异均有显着性（ P < 0. 05） ,而两个内侧区（ VM 与 DM）、两个腹侧区（ VL 与 VM）差异无显着性（ P > 0. 05） .

　　腹侧 SOM 阳性细胞数量（ 53. 32 ±4. 10） %多于背侧（ 46. 68 ±4. 30） %,内侧（ 55. 98 ±2. 06） % 多于外侧（ 44. 02 ±2. 32） %.单位面积 SOM 阳性细胞数（表1） VM 区最多（ 32 ± 7）个 / mm2,其次是 VL 区（ 27 ±3）个 / mm2和 DM 区（ 26 ±4）个/mm2,最少的是 DL区（ 21 ±5）个/mm2,其中 DL 与 VM 间差异均有显着性（ P < 0. 05） ,其他区域差异无显着性（ P >0. 05） .